Polimeraz zincir reaksiyonu yönteminin tam açıklaması

Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), insan DNA'sının kısa bir bölümünün çoklu kopyalarının oluşturulmasıdır. Balgam, kan, amniyon sıvısı, tükürük, idrar vb. Araştırma ve sonuç elde etmek için az miktarda fizyolojik materyal gereklidir.

Polimeraz zincir reaksiyonu nedir?

PCR yöntemi, 1998'de gelişimi için Nobel Ödülü'nü alan Amerikalı bilim adamı Melison tarafından geliştirilmiştir. Aktif olarak kullanılan:

• enfeksiyonların erken teşhisi ile onkolojik patolojiler;
• son derece az miktarda DNA'nın incelenmesi için yapılan adli incelemede;
• veterinerlikte, biyolojide, moleküler genetikte;
• DNA ile kişisel tanımlama için;
• babalık onaylamak için;
• ekolojide, örneğin, ürünün kalitesini takip ederken, antropolojide.

Reçete PCR kimdir?

Enfeksiyöz patolojilerin tanısında polimeraz zincir reaksiyonu, en doğru ve güvenilir analizi sağlayan en güvenilir yöntemlerden biridir. Örneğin, klamidya analizinin güvenilirliği% 100'e yakındır. Çoğu zaman, bu tanısal önlem, test sırasında belirli bir patojeni tanımlamakta zorluk çeken hastalara reçete edilir.

PCR laboratuvar testleri kullanın:

1. İdrar ve genital sistem enfeksiyonuna neden olan patojenik organizmaları araştırmak için, mahsul veya immünoloji yöntemi uygulanırken tanımlanması zordur.
2. HIV'in ilk aşamada, örneğin enfekte olmuş ebeveynlerden gelen yenidoğanlarda, ilk analizin pozitif fakat sorgulanabilir bir sonucu ile yeniden analizi için.
3. Onkolojik patolojiyi erken bir aşamada oluşturmak ve hastalarda tedavi rejiminin bireysel düzeltilmesi için.
4. Kalıtsal patolojilerin erken tespiti ve potansiyel tedavisi için. Bu nedenle, gelecekteki birçok ebeveyn genetik hastalıkların taşıyıcıları olup olmadığını öğrenmek için test ediyor. Çocuklarda, bu yöntem kalıtsal hastalıklara maruz kalma olasılığını belirler.

Ayrıca, bu teknik kullanılır:

• erken gebelikte fetal patolojinin tespiti için;
• Organ nakli için ameliyat öncesi hastalarda - dokuların uyumluluğunu belirlemek için gerekli
• donörün kanındaki tehlikeli patojenleri tespit etmek;
• gizli enfeksiyonları tespit etmek için yenidoğanlarda;
• antiviral veya antimikrobiyal tedavi sonuçlarını değerlendirmek.

Neden bu prosedürden geçiliyor?

PCR, neredeyse% 100 sonuç veren oldukça etkili bir teşhis yöntemi olarak kabul edildiğinden, bu prosedür kullanılır:

1. Teşhisi onaylamak veya hariç tutmak için.
2. Tedavinin etkinliğinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesi için.
3. Birçok durumda, diğer bakteriyolojik, virolojik tekniklerin işe yaramaz olduğu kanıtlanmışsa, gelişmekte olan patolojiyi saptamanın tek yolu bu yöntem olarak kabul edilir.
4. PCR prosedürünü kullanan virüsler enfeksiyondan hemen sonra ve ana semptomların başlamasından önce tespit edilir.
5. Mikroorganizmaların erken tespiti derhal tedaviye izin verecektir.

Ek olarak, PCR analizi canlı veya ölü numunelerde az miktarda mikroorganizmayı hızlıca tespit etmenizi sağlar. Bu nedenle, bu teknik örneğin bir tüberkül basili gibi belirli bir patojenik organizmayı aramak için kullanılır.

Ek olarak, PCR analizi kullanılır:

• DNA'nın tedaviye başlayabilmesi için mümkün olan en kısa sürede izin verecek olan belirli antibiyotik tiplerine duyarlılığını belirlemek;
• salgınların yayılmasını kontrol etmek;
• Yeni tür mikrop ve patojenleri tanımlamak ve izlemek.

Temel PCR tipleri

Standart yöntem

PCR analizi, primer enzimler kullanılarak spesifik bir DNA fragmanının ve RNA'nın iki katına çıkarılması temelinde gerçekleştirilir. Bu sayede araştırmacı gerekli miktarda malzemeyi alır.

Gerçek zamanlı PCR

Bu tür bir araştırmada, belirli bir parçanın tanımlanması süreci her bir döngüden geçtikten sonra başlatılır. Bu tür araştırmalar vücuttaki virüslerin ve mikroorganizmaların sayısı hakkında bilgi edinmeyi, yani nicel bir analiz yapılmasını sağlar.

PCR'den Ters Transkripsiyon Modu

Bu analiz, genetik temeli RNA olarak adlandırılan virüslerin daha fazla tespiti için tek iplikli RNA aramak için kullanılır. Örneğin, bu hepatit C virüsü, immün yetmezliği vb. Bu çalışmanın yürütülmesinde, tek zincirli DNA'nın inşa edildiği özel bir enzim kullanılmıştır. Sistem daha sonra ikinci DNA zincirini geri yükler ve geleneksel prosedürü gerçekleştirir.

İçin endikasyonlar

PCR prosedürü bulaşıcı hastalıklar, obstetrik, üroloji, jinekoloji ve nefroloji, pediatri vb. Kliniklerde kullanılır. Atama analizi için en yaygın endikasyonlar aşağıdaki gibidir:

• kalıtsal patolojilerin varlığında bir çocukta genetik anormalliklerin gelişme riskini belirlemek;
• her iki ebeveyni de hamileliği planlarken veya anne çocuğunu taşırken zor durumda olduğunda teşhis etmek;
• kısırlık nedenlerini belirlemek için gebe kalma güçlüğü ile;
• Akut evrede şüpheli cinsel enfeksiyonlar varsa ya da kronik evreye geçme riskleri varsa;
• bilinmeyen kaynaklı enflamatuar süreçlerin nedenlerini tespit etmek;
• korunmasız geçici seks ile;
• patojenik bir mikroorganizmanın belirli bir ilaca duyarlılığını belirlemek;
• belirgin semptomlar olmadan patojenleri saptamak için gizli enfeksiyon şüphesi;
• bir hastalıktan iyileşmeyi, yani geriye dönük tanı koymak için.

Ayrıca, bu gibi patojenleri doğru bir şekilde tanımlamak gerektiğinde PCR kullanılır: hepatit virüsleri, insan immün yetmezliği, sitomegalovirüs, herpes simpleks virüsü, kızamıkçık virüsü, papilloma virüsü.

Bu yöntem, enfeksiyonları belirlemek için kullanılır: bulaşıcı mononükleoz, kene kaynaklı ensefalit, kandida mantarları, genital enfeksiyonlar ve tüberkülozun neden olduğu kandidiyazis.

Kontrendikasyonları ve güvenli yöntem ise?

Bu prosedür vücut üzerinde herhangi bir etki yapmadan yapıldığından ve araştırma için alınan sadece biyolojik materyal kullanıldığından, vücut için potansiyel bir tehlike olmadığı için herhangi bir kontrendikasyon yoktur. Fakat örneğin, rahim servikal kanalının biyomateryal örneklemesi kolposkopiden sonra yapılmaz. Teslim smear, kazıma adet sonu ve akıntının tamamen durması sadece 4-7 gün sonra izin verilir.

Prosedür için hazırlık özellikleri

Yabancı bir patojenin DNA'sının tespit edildiği PCR analizi için bir örnek olarak, biyolojik bir sıvı veya doku kullanılır. Test maddesinin alımı, bir damardan kan numunesi alma, burun boşluğundan kazıma, gırtlak, serviks, üretra şeklinde gerçekleşir. Teşhis prosedüründen önce doktor hastaya hangi malzemenin alınacağını açıklamalıdır:

• herpes enfeksiyonlarının analizinde, mononükleoz, idrarın bir analizini ve ayrıca farenksin bir lekesini alır;
• hepatit veya toksoplazmoz testi yapılırken, damardan kan alınır;
• çeşitli CNS hasarlarını teşhis etmek için beyin omurilik sıvısı alınır;
• pulmonolojide, PCR analizi için örnekler plevral sıvı ve balgam;
• Hamilelik sırasında intrauterin enfeksiyonlarla ilgili bir çalışma yürütürse, amniyotik sıvı, plasental hücreler analiz için kullanılır.

Sonucun güvenilirliği ve doğruluğu, biyomateryali almanın kısırlığına ve koşullarına bağlıdır. PCR çalışmaları oldukça hassas olduğu için, alınan maddenin herhangi bir kirlenmesi sonuçları bozabilir. Biyomalzemenin teslimi için yetkin hazırlık hasta için herhangi bir zorluk yaratmaz.

Ancak bir takım önerilerde var:

• Cinsel yolla bulaşan enfeksiyonları analiz ederken, malzemenin teslimatından üç gün önce samimi temasları dışlamak gerekir;
• Vajinal preparatların kullanımını 72 saat durdurmalıdır;
• bir önceki günün akşamından, çalışılan alanların hijyeninin gerçekleştirilememesi;
• Üretradan bir örnek almadan önce 3-4 saat, idrara çıkma hariç bırakılmalıdır;
• testleri yaptırmadan bir ay önce antibiyotik almayı bırakmanız gerekir;
• sabahları yemek yemeden ve içmeden önce aç karnına kan verilir;
• Sabah idrarı tuvalete gittikten sonra steril bir kapta toplanır.

PCR nasıl?

Özel bir reaktörde araştırma yaparken belli bir döngü tekrar eder:

1. İlk adım. Denatürasyon. Malzemenin ısıtıldığı ve DNA'nın iki zincire ayrıldığı aplikatöre tükürük, kan, jinekolojik testler ve diğer maddeler yerleştirilir.
2. İkinci adım. DTC molekülünün gerekli parçalarını tanıyan ve ona bağlanan özel bileşenler ekleyerek alınan maddenin hafifçe soğumasını sağlayın.
3. 3 adım. Uzama. İşlem sırasında, patojenik organizmanın bir DTC parçası tamamlanır, bir kopyası oluşturulur. Bu döngü, spesifik DNA fragmanının kopyasını ikiye katlayan tekrarlanır.

Birkaç saat içinde, bu parçanın birçok kopyası oluşur, numunelerdeki varlıkları ortaya çıkar. Daha sonra, sonuçlar çeşitli patojenlerin veri tabanları ile karşılaştırılır. Bu enfeksiyon türünü belirlemenizi sağlar.

Kod çözme analizinin özellikleri?

Çalışmanın nihai sonucu biyolojik analizden birkaç gün sonra hastaya verilecektir.

Nitel analiz

Bu durumda verilen olumsuz sonuç, test için verilen sıvıda bulaşıcı ajan bulunmadığı anlamına gelir. Olumlu bir sonuç, biyolojik bir numunedeki patojenik virüslerin veya bakterilerin tespit edildiğini gösterir. Sonuç pozitifse, ancak aynı zamanda kişinin enfeksiyonun aktivasyon belirtileri yoksa, vücudun böyle bir durumuna asemptomatik sağlıklı taşıyıcı denir.

En sık, viral patolojilerde biyomateryali alırken bu gözlemlenir. Bu durumda, tedavi gerekli değildir, ancak sürekli tıbbi gözetim gerektirir. Bu şartlar altında bir olasılık vardır:

• virüsün taşıyıcıdan sağlıklı insanlara yayılması;
• Sürecin aktivasyonu ve patolojinin kronik forma geçişi.

Kantitatif analiz

Kantitatif sonuç, belirli bir enfeksiyon türü için özel olarak bir uzman tarafından belirlenir. Elde edilen sonuçlara dayanarak, tedavinin mümkün olan en kısa sürede reçete edilmesini mümkün kılan gelişme derecesini, patolojinin evresini değerlendirmek mümkündür.